柱式PAGE胶回DNA收试剂盒

产品货号：

GS2244

中文名称：

柱式PAGE胶回DNA收试剂盒

英文名称：

PAGE Gel DNA Column Recovery Kit

产品规格：

50T|100T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒提供了从PAGE胶中简单而高效地回收DNA的方法。用Diffusion buffer处理后PAGE胶中DNA片段进入溶液，和Binding buffer II及异丙醇混合后DNA片段被选择性吸附到硅胶柱上，其他杂质如蛋白、盐离子等则被洗涤掉。试剂盒中SD-10 Spin Column，最高可吸附10mg单链或双链的DNA。用Elution Buffer洗脱后，DNA可应用于测序、限制性酶切反应、标记、PCR和Southern-blotting等下游实验中。

产品特点

相对常规煮沸法具有较高的回收率，质量高，重复性好。
可回收50～500bp双链或单链DNA片段，回收效率高于60%。
无需苯酚/氯仿抽提；无需乙醇沉淀，洗脱体积小，可用于多种下游实验。

组分	50T	100T
Diffusion buffer	12mL	24mL
Binding buffer II	50mL	100mL
Wash buffer	12mL	24mL
Elution Buffer	5mL	10mL
SD-10 Spin Column	50个	50个
2mL Collection Tube	50个	50个

保存：常温（18～25℃）

注意事项

Diffusion buffer使用前，50℃加热5min，以溶解低温贮存过程形成的沉淀。
Binding buffer II使用前，50℃温浴，可溶解沉淀且对研究结果无影响。
Wash buffer使用前，12mL Wash Solution应加入48mL无水乙醇，24mL Wash Solution应加入96mL无水乙醇。
如果Wash Solution的体积由于运输过程泄漏而不足12mL或24mL，需要重新测量其体积，并确定需要加入多少ml的无水乙醇(无水乙醇：Wash Solution=4:1)。
Elution BufferElution Buffer为2.0mmol/L Tris-HCl，pH8.5。虽然也能使用TE buffer pH8.0或水替代，但得率通常会减少20%左右。

PAGE胶电泳实验后，确定感兴趣的DNA片段所在位置。
用干净、锋利的手术刀将DNA片段从PAGE胶上切下。放入1.5mL离心管中，称重。
注意：尽可能多地去掉不含目标DNA的PAGE胶。
每100mg的胶块加入200μL Diffusion buffer，然后用枪头将泡在溶液当中的胶块捣碎。将离心管置于55℃水浴2h，间或混匀，以促进胶中DNA扩散到溶液中。
注意：如果DNA片段长度为500～1000nt (bp)，请温浴3-5h，同时回收率会少量降低。
1.5mL离心管于5000rpm离心5min，并将上清转移到一个新的1.5mL离心管中。
注意：不要将残余的胶块转移到1.5mL离心管中，否则会使回收效率降低。
确定上清液体积，每100μL上清液加入500μL Binding buffer II和300μL异丙醇，涡旋混匀。
将SD-10 spin column放入2mL收集管中，将上述混合液加入到EZ -10 spin column。
室温静置2min，10000rpm离心30 s，倒掉收集管中的液体。
将SD-10 spin column放回2mL收集管，加入500μL Wash buffer到吸附柱中，然后10000rpm离心30 s，倒掉收集管中的液体。
重复步骤8一次。
将SD-10 spin column放回2mL收集管，12000rpm离心2min，以彻底去除残留的Wash buffer。
注意：离心后室温静置10min或烘箱50℃烘5min，使Wash buffer中残留的乙醇挥发干净，从而获得更高的洗脱效率。
将SD-10 spin column放入一个新的1.5mL离心管中，加入30μL Elution Buffer，静置1min，然后10000rpm离心1min，此时离心管中含有目的DNA片段，请保存于-20℃。
注意：为使DNA被充分洗脱，Elution Buffer或ddH2O可加热到60℃后再加入到SD-10 Spin column。

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